2563

โครงการวิจัยเดี่ยว

งบประมาณส่วนตัว

การกระจายของเครื่องหมายพันธุกรรมไมโครแซทเทลไลท์บนโครโมโซมสัตว์เลื้อยคลาน (Cyrtodactylus jarujini และ C. doisuthep) โดยใช้เทคนิคฟลูออเรสเซนต์อินซิทูไฮบริไดเซชั่น

Microsatellite DNA Dispersions on Chromosomes of Reptiles (Cyrtodactylus jarujini and C. doisuthep) by Fluorescence in situ Hybridization technique

1. รองศาสตราจารย์ ดร.สุมาลี พิมพันธุ์ (หัวหน้าโครงการ)

คณะวิทยาศาสตร์และเทคโนโลยี

การศึกษาครั้งนี้มีวัตถุประสงค์เพื่อศึกษาโครโมโซมของตุ๊กแกป่าจำนวน 1 สกุล 2 ชนิด ได้แก่ Cyrtodactylus jarujini และ C. doisuthep โดยแต่ละชนิดมีชื่อสามัญ ได้แก่ ตุ๊กแกป่าจารุจินต์ และ ตุ๊กแกป่าดอยสุเทพ ตามลำดับ การจัดแคริโอไทป์ของตุ๊กแกป่าได้จากการย้อมสีโครโมโซมแบบดั้งเดิม (conventional staining technique) พบว่าตุ๊กแกป่าชนิด C. jarujini และ C. doisuthep มีจำนวนโครโมโซมเท่ากับ 40 และ 34 แท่ง ตามลำดับ และมีจำนวนโครโมโซมพื้นฐาน (Fundamental number, NF) เท่ากับ 66 และ 61 ตามลำดับ ผลจากวัดความยาวเฉลี่ยของโครโมโซมจากภาพเซลล์ระยะเมทาเฟสจำนวน 20 เมทาเฟสในแต่ละชนิด เพื่อระบุขนาดและชนิดของโครโมโซม สามารถเขียนสูตรแคริโอไทป์ของตุ๊กแกป่าแต่ละชนิดได้เป็น 2n (diploid) 40 = L^sm₁ + L^sm₂ + L^t₃ + M^m₁ + M^t₄ + S^m₂+ S^a₂+ S^t₅ และ 2n (diploid) 34 = L^sm₃ + L^m₂+ L^t₃+ M^m₁+ M^t₂ + S^m₄+ S^a₁+ S^t₁ ตามลำดับ การย้อมสีโครโมโซมของตุ๊กแกป่าด้วยซิลเวอร์ไนเตรตเพื่อระบุตำแหน่ง Nucleolar Organized Regions หรือ NORs บนโครโมโซมของตุ๊กแกป่าในระยะเมทาเฟส พบว่าตุ๊กแกป่า 2 ชนิดนี้มีตำแหน่ง NORs อยู่บนโครโมโซมต่างแท่งกัน โดย C. jarujini อยู่บนแขนข้างสั้นของโครโมโซมคู่ที่ 13 และ 14 ทั้งในเพศผู้และเพศเมีย ส่วน C. doisuthep อยู่บนปลายแขนข้างสั้นและแขนข้างยาของโครโมโซมแท่งที่ 9 และอยู่บนแขนข้างยาวของโครโมโซมคู่ที่ 13 ทั้งในเพศผู้และเพศเมีย
 
การศึกษาการกระจายของลำดับเบสไมโครแซทเทลไลท์บนโครโมโซมของตุ๊กแกป่าโดยใช้เทคนิค Fluorescence in situ Hybridization (FISH) ใช้โพรบไมโครเซทเทลไลท์ 4 ประเภท เป็นเครื่องหมายทางพันธุกรรม ได้แก่ mono-, di-, tri- และ oligonucleotides หลายชนิด ได้แก่ A₂₀ TA₁₅ CGG₁₀ GAA₁₀ และ telomeres ที่มีลำดับเบส TTAGGG_n ตามลำดับ พบว่ามีรูปแบบการกระจายของดีเอ็นเอไมโครแซทเทลไลท์ที่แตกต่างกัน ตามแต่ละชนิดของโพรบ แต่ละโพรบปรากฏสัญญาณ และมีรูปแบบการกระจายของไมโครแซทเทลไลท์ดีเอ็นเอที่หลากหลาย ทั้งในรูปแบบที่มีการสะสมมากบริเวณเซนโตรเมียร์และเทโลเมียร์ กระจายทั่วทั้งจีโนม หรือสะสมมากปรากฏเป็นจุดหนาแน่นในโครโมโซมบางแท่ง ความสัมพันธ์และวิวัฒนาการของโครโมโซมของตุ๊กแกป่า 2 ชนิด ในการศึกษาครั้งนี้ยังไม่ชัดเจน อย่างไรก็ตามจากสัญญาณโพรบบางชนิดแสดงให้เห็นถึงบริเวณที่มีลำดับเบสซ้ำสะสมมากที่มีความเชื่อมโยงกันระหว่างโครโมโซมของตุ๊กแกป่าทั้ง 2 ชนิด ซึ่งจำเป็นจะต้องมีการศึกษาเพื่อยืนยันสมมติฐานดังกล่าวในการศึกษาครั้งต่อไปในอนาคต



The purpose of this study is to study chromosomes of retiles that classified in order Squamata, family Gekkonidae, 1 genus, 2 species including of Cyrtodectylus jarujini and C. doisuthep. The common names are Jarujin bent-toed gecko and Doi Suthep bent-toed gecko respectively. Each species have a species distribution on the different part of Thailand. Reptile in Thailand has rich of species and widely distribution. The karyological typing from a conventional staining technique of the Gekkonid in this study found that C. jarujini and C. doisuthep have the diploid numbers equal to 40 and 34 respectively. The fundamental numbers (NF) including of 66 and 61 respectively. All of dates measured from the chromosome at metaphase stage 20 pictures to describe the sizes, shapes, and numbers of chromosome. In addition, we created the chromosome formula of the chromosome in each species showed that 2n (diploid) 40 = L^sm₁ + L^sm₂ + L^t₃ + M^m₁ + M^t₄ + S^m₂+ S^a₂+ S^t₅ and 2n (diploid) 34 = L^sm₃ + L^m₂+ L^t₃+ M^m₁+ M^t₂ + S^m₄+ S^a₁+ S^t₁ respectively. Moreover, we stained the chromosome with silver nitrate to identify the NORs bearing on the chromosomes and we found that they have different NORs positions on the chromosome of the Gekkonids.
 
The study of chromosome has been only studied in the level of number, shape and sizes that karyological typing from conventional staining of chromosomes. This study focus in the level of molecular by using FISH (Fluorescence in situ Hybridization) technique, microsatellites probes were used to labeled form Nick translation. Here we used 4 types of microsatellite probes compose of mono-, di-, tri- and oligotides each probe including of A₂₀ TA₁₅ CGG₁₀ GAA₁₀ and telomere (TTAGGG_n). Each probe was hybridized with each chromosome of the Gekkonid chromosomes. The distribution pattern is expected to find the relation and evolution of chromosomes. The signals from probes showed the different pattern in each chromosome of the Gekkonids depend on probe types. Some probe shown high distribution on centromere and telomere regions, another bearing dispersed on whole genomes including chromosomes, and some has strong signal on only a pair of homologous chromosomes. The relation of microsatellite DNA on chromosomes can be the evidence of chromosomal evolution, in this study still not has microsatellites result information enough by limitations of short times and techniques. By the way we could proof the hypothesis from this study to confirm the relation between Gekkonids’ chromosomes in the future study.

FISH (Fluorescence in situ Hybridization),ดีเอ็นเอไมโครแซทเทลไลท์,โพรบประเภท momo-,di-,tri-,oligonucleotide,แคริโอไทป์,การย้อมสีโครโมโซมแบบธรรมดา (conventional staining),NORs (Nucleolar Organized Regions),microsatellite DNA,momo-,oligonucleotide probes,karyotype,conventional staining

ดาวน์โหลด เปิด : 73 ครั้ง

ดาวน์โหลด เปิด : 65 ครั้ง:

183 ครั้ง